能夠還原斐林(H.von Fehling)試劑(本尼迪特試劑)或托倫斯(B.Tollens)試劑的糖稱(chēng)爲還原糖,所有的單糖(除二羟丙酮),不論醛糖、酮糖都是還原糖。大部分雙糖也是還原糖,蔗糖例外。斐林試劑是含Cu2+絡合物的溶液,被還原後得到磚紅色Cu2O的沉澱。托倫斯試劑被還原後能生成單質銀,發生“銀鏡反應"。分子結構中含有還原性基團(如遊離醛基或遊離酮基)的糖,叫還原糖。如葡萄糖。果糖含有遊離的酮基,所以果糖也屬於(yú)還原糖。
一、還原性質
一般情況下,單(dān)糖的還原能力主要來自它的醛基,如葡萄糖,而多糖則大多因爲半縮醛羟基的存在。還原後,自己會變(biàn)成糖酸。如葡萄糖就會變(biàn)成葡萄糖酸。如該糖是酮糖,羰基就會斷裂,分解成兩個較小的分子,如果糖。所有單(dān)糖(除二羟丙酮)及大部分二糖(除蔗糖等)在本尼迪克特試驗中呈陽性反應,所以大部分單(dān)糖及二糖都具有還原性。
二、還(hái)原糖直接滴定法原理:
試樣經除去蛋白質後(hòu),以亞甲藍作指示劑,在加熱條件下滴定标定過(guò)的堿性酒石酸銅溶液(已用還原糖标準溶液标定),根據樣品液消耗體積計算還原糖含量。
三、還(hái)原糖滴定注意事項(xiàng):
1)堿性酒石酸甲、乙液與還原糖反應是定量關系,它們的多少直接影響測(cè)定結果的多少,從而影響檢測(cè)數據,所以堿性酒石酸甲、乙液必須精確(què)吸取,保證每次取樣量一緻。
影響堿(jiǎn)性酒石酸銅(tóng)甲、乙液吸取誤差的因素:
① 堿(jiǎn)性酒石酸銅(tóng)甲、乙液在吸管中刻度液面的位置要保持一緻。
② 吸管外壁殘(cán)留的液體多少會造成堿性酒石酸甲、乙液取樣量的誤差,所以要習慣性的對吸管外壁的堿性酒石酸甲、乙液進行相同處(chù)理,保證每次外壁殘(cán)留液相對一緻,從而減少液體取樣量的誤差。
③ 堿性酒石酸銅甲、乙液放入三角瓶的速度保持一緻(不可吹),放完後要觀(guān)察其殘(cán)留在吸管中有多少,要保證每次殘(cán)留一緻。
④ 堿性酒石酸銅甲、乙液的不是很明顯的沉澱(或濃度變化)也會對測定造成波動,取堿性酒石酸銅甲液的器具切記不要與堿性物質接觸(同時也要注意防止帶入堿性物質於(yú)甲液中),以避免甲液産生沉澱,盛甲液的容器時間長瞭(le),内壁上也會殘留固體(硫酸銅),這些固體顆粒也會造成檢測誤差。
2)滴定速度要保持均衡一緻,趁熱以每2秒一滴的速度滴定爲好(速度不要受滴定時間的長(zhǎng)短而改變(biàn))。
3)試樣溶液滴定時要進行預測(cè),正式測(cè)定時從(cóng)滴定管滴加比預測(cè)體積少1ml的試樣溶液至錐形瓶中,控制在2min中内加熱至沸,保持沸騰以1滴/2s的速度滴定至終點。
4)電(diàn)爐的溫度對檢測(cè)結果也有影響,所以要保證電(diàn)爐充分預熱,同時三角瓶在電(diàn)爐上的放置位置要保持一緻。
5)測(cè)定時液體沸騰後(hòu)的開始滴定的時間也要保持一緻2min内,一般等液體充分沸騰後(hòu)開始滴定。
6)滴定終點(diǎn)的判斷(duàn)也要保持一緻,等液體藍色剛好褪去爲爲滴定終點(diǎn)。
7)糖液稀釋(shì)及取樣也要注意精確(què),注意吸管正確(què)使用方法。
8)滴定過(guò)程中最好佩戴面罩和口罩以防沸騰液體噴濺或是發(fā)生三角爆裂等。
9)注意滴定管漏液、變(biàn)形,滴定管尖-端氣泡等對檢測(cè)數值的影響。
10)三角瓶使用後(hòu)清洗幹(gàn)淨。
11)滴定開始前可以在空白三角瓶和樣品三角瓶内加入幾(jǐ)粒小顆粒玻璃珠,促進(jìn)樣品受熱均勻以及防爆裂。
12)如果溶液中還原糖含量較低,産(chǎn)生的氧化亞銅便會較少,試驗後(hòu)隻會有綠色、混濁的黃色或橙色等。
13)在酸性環境中,Cu2 會變(biàn)得較爲穩定,不容易發(fā)生反應,所以不能進行試驗。
14)醇和醛在這測(cè)試亦會産(chǎn)生磚紅色沉澱物,因爲兩者都具有在這試驗中産(chǎn)生作用的官能團。