人雌二醇(E2)酶聯免疫實驗原理及操作方法

人雌二醇(E2)酶聯免疫實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定标本中人雌二醇(E2)水平。用純化的人雌二醇(E2)抗體包被微孔闆，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入雌二醇(E2)，再與HRP标記的雌二醇(E2)抗體結合，形成抗體-抗原-酶标抗體複合物，經過*洗滌後加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，並在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顔色的深淺和樣品中的雌二醇(E2)呈正相關。用酶标儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)，通過标準曲線計算樣品中人雌二醇(E2)濃度。
人雌二醇(E2)酶聯免疫操作方法
1. 标準品的稀釋
：本試劑盒提供原倍标準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
80 pmol/L 5号标準品 150μl的原倍标準品加入150μl标準品稀釋液
40 pmol/L 4号标準品 150μl的5号标準品加入150μl标準品稀釋液
20 pmol/L 3号标準品 150μl的4号标準品加入150μl标準品稀釋液
10 pmol/L 2号标準品 150μl的3号标準品加入150μl标準品稀釋液
5 pmol/L 1号标準品 150μl的2号标準品加入150μl标準品稀釋液
2. 加樣：分别設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶标試劑，其餘各步操作相同)、标準孔、待測樣品孔。在酶标包被闆上标準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然後再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度爲5倍)。加樣将樣品加於酶标闆孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封闆膜封闆後置37℃溫育30分鍾。  
4. 配液：将30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋後備用
5. 洗滌：小心揭掉封闆膜，棄去液體，甩幹，每孔加滿洗滌液，靜置30秒後棄去，如此重複5次，拍幹。
6. 加酶：每孔加入酶标試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鍾.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(此時藍色立轉黃色)。
11. 測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液後15分鍾以内進行。
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