豬睾酮（T）試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
檢測範圍： 96T
6nmol /L - 180 nmol /L
使用目的：
本試劑盒用於測定豬肉樣本中睾酮（T）含量。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定标本中豬睾酮（T）水平 。用純化的豬睾酮（T）抗體包被微孔闆，制成固相抗體 ，往包被單抗的微孔中依次加入睾酮（T），再與HRP标記的睾酮（T）抗體結合，形成抗體-抗原-酶标抗體複合物，經過*洗滌後加底物TMB顯色 。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，並在酸的作用下轉化成zui終的黃色 。顔色的深淺和樣品中的睾酮（T）呈正相關。用酶标儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過标準曲線計算樣品中豬睾酮（T）濃度 。
試劑盒組成
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1
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30倍濃縮洗滌液
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20ml×1瓶
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7
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終止液
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6ml×1瓶
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2
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酶标試劑
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6ml×1瓶
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8
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标準(zhǔn)品（320nmol/L）
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0.5ml×1瓶
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3
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酶标包被闆
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12孔×8條
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9
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标準品稀釋液
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1.5ml×1瓶
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4
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樣品稀釋液
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6ml×1瓶
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10
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說明書
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1份
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5
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顯色劑A液
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6ml×1瓶
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11
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封闆膜
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2張
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6
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顯色劑B液
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6ml×1/瓶
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12
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密封袋
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1個
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标本要求
1．标本採(cǎi)集後盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取後應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可将标本放於(yú)-20℃保存，但應避免反複凍融
2．不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
1. 标準品的稀釋：本試劑盒提供原倍标準品一支 ，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
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160 nmol /L
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5号标準品
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150μl的原倍标準(zhǔn)品加入150μl标準(zhǔn)品稀釋(shì)液
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80 nmol /L
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4号标準品
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150μl的5号标準(zhǔn)品加入150μl标準(zhǔn)品稀釋(shì)液
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40 nmol /L
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3号标準品
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150μl的4号标準(zhǔn)品加入150μl标準(zhǔn)品稀釋(shì)液
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20 nmol /L
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2号标準品
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150μl的3号标準(zhǔn)品加入150μl标準(zhǔn)品稀釋(shì)液
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10 nmol /L
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1号标準品
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150μl的2号标準(zhǔn)品加入150μl标準(zhǔn)品稀釋(shì)液
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2. 加樣：分别設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶标試劑，其餘各步操作相同）、标準孔、待測樣品孔。在酶标包被闆上标準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然後再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度爲5倍）。加樣将樣品加於酶标闆孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻 。
3. 溫育：用封闆膜封闆後置37℃溫育30分鍾。
4. 配液 ：将30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋後備用
5. 洗滌 ：小心揭掉封闆膜 ，棄去液體，甩幹，每孔加滿洗滌液，靜置30秒後棄去，如此重複5次，拍幹。
6. 加酶：每孔加入酶标試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育 ：操作同3。
8. 洗滌 ：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻 ，37℃避光顯色15分鍾.
10. 終止 ：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11. 測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液後15分鍾以内進行。
計算
以标準物的濃度爲橫(héng)坐标，OD值爲縱坐标，在坐标紙上繪出标準曲線，根據樣品的OD值由标準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用标準物的濃度與OD值計算出标準曲線的直線回歸(guī)方程式，将樣品的OD值代入方程式 ，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即爲樣品的實際濃度。
注意事項
1．試劑盒從(cóng)冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鍾後(hòu)方可使用 ，酶标包被闆開封後(hòu)如未用完，闆條應裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌(dí)液可能會(huì)有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌(dí)時不影響結果。
3．各步加樣均應使用加樣器，並(bìng)經常校對其準確(què)性 ，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鍾内，如标本數量多，推薦使用排槍加樣。
4． 請每次測定的同時做标準曲線，做複孔。如标本中待測物質含量過高（樣本OD值大於标準品孔*孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）後再測定，計算時請zui後乘以總稀釋倍數（×n×5）。
5． 封闆膜隻限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物請避光保存。
7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶标儀讀(dú)數爲準.
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳(chuán)染物處(chù)理。
9．本試(shì)劑(jì)不同批号組分不得混用。
10. 如與英文說(shuō)明書(shū)有異，以英文說(shuō)明書(shū)爲準。
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6個月
：
：張
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