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瑞氏染液使用方法

  • 發布日期:2013-05-29      浏覽次數:2253
    • 瑞氏染液使用方法:

      瑞氏染料是由堿(jiǎn)性染料美藍(lán)(Methvlem blue)和酸性染料黃色伊紅(Eostm Y)合稱(chēng)伊紅(hóng)美藍染料即瑞氏(美藍-伊紅(hóng)Y)染料。
      用甲醇作瑞氏染料溶劑(jì),即成瑞氏染液。甲醇是瑞氏染料良好溶劑(jì),有兩(liǎng)種作用:
      1)甲醇使瑞氏染料中美藍(M)與伊紅(E)在溶液中離(lí)解,可使細胞成分選擇性吸附其中的有色物質而著(zhe)色。
      ME(瑞氏染料)----M+ + E-
      在配制的瑞氏染液中美藍如放置過(guò)久即可氧化而含有天青,美藍天青與伊紅(hóng)化合物能使核染成紫紅(hóng)色,但不能使胞漿染爲藍色,多餘美藍就可以使胞漿染成藍色 ,染色主要是化學作用,是離子彼此結合的反應。
      2)甲醇具有強大的脫水力,可将細胞固定在一定形态及增加細胞結構的表面積,提高細胞對(duì)染料吸收作用,同時由於(yú)甲醇吸附染色液中的水 ,使染色液升溫,加速染色反應。
      染液配制
      一、瑞氏染液配制:
      瑞氏染料 830gm1g
      甲醇(AR 500ml600ml
      1)先稱幹燥(事先放入溫箱幹燥過夜)瑞氏染料放置乳缽(bō)内,用乳棒輕輕敲碎染料成粉末,再行研磨至聽不到研芝麻聲即呈細粉末,加少許甘油或甲醇溶解研磨,使染料在乳缸内顯“一面鏡”光澤,而無染料粉粒沉著(zhe)。
      2)再加較多量甲醇研磨呈一面鏡光亮,靜置片刻,将上層(céng)液體倒入一清潔儲存瓶内(用甲醇空瓶),再加甲醇研磨 ,重複數次,至乳缽(bō)内染料及甲醇用完爲止,搖勻,密封瓶口。
      3)存室溫暗處(chù),儲(chǔ)存愈久,則染料溶解 、分解就越好,一般儲(chǔ)存3個月以上爲佳。
      二、緩沖液作用:
      1)染色對(duì)氫離子濃度是十分敏感的,據觀(guān)察pH值的改變(biàn),可使蛋白質與染料形成的化合物重新離(lí)解。
      2)緩沖液須保持一定的pH使染色穩定,PBSpH 一般在6.4~6.8
      3)偏堿性染料可與緩(huǎn)沖(chōng)液中酸基起中和作用,偏酸性染料則與緩(huǎn)沖(chōng)液中的堿基起中和作用,使pH恒定。
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