人氧化型谷胱甘肽（GSSG）試劑盒使用說明書

人氧化型谷胱甘肽（GSSG）試劑盒使用說明書

本試劑僅供研究使用       

目的
：本試劑盒用於測定人血清，血漿及相關液體樣本中氧化型谷胱甘肽（GSSG）的含量。

實驗原理：

  人氧化型谷胱甘肽（GSSG）試劑盒應用雙抗體夾(jiā)心法測(cè)定标本中人氧化型谷胱甘肽（GSSG）水平。用純化的人氧化型谷胱甘肽（GSSG）抗體包被微孔闆，制成固相抗體(tǐ)，往包被單(dān)抗的微孔中依次加入氧化型谷胱甘肽（GSSG），再與HRP标記的氧化型谷胱甘肽（GSSG）抗體結合，形成抗體-抗原-酶标抗體複(fù)合物，經過*洗滌(dí)後加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，並(bìng)在酸的作用下轉化成zui終的黃(huáng)色。顔色的深淺和樣品中的氧化型谷胱甘肽（GSSG）呈正相關。用酶标儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過(guò)标準曲線計(jì)算樣品中人氧化型谷胱甘肽（GSSG）含量。

人氧化型谷胱甘肽（GSSG）試劑盒組成  

1  30倍濃縮洗滌液  20ml×1瓶  7  終止液  6ml×1 瓶

2  酶标試劑  6ml×1瓶  8  标準品（320µg/L）  0.5ml×1 瓶

3  酶标包被闆  12 孔×8條  9  标準品稀釋液  1.5ml×1 瓶

4  樣品稀釋液  6ml×1瓶  10  說明書  1 份

5  顯色劑A 液  6ml×1瓶  11  封闆膜  2 張    

6  顯色劑B液  6ml×1/瓶  12  密封袋  1 個

标本要求  

1．标本採(cǎi)集後盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行
，提取後應盡快進行實驗。若不能

馬上進(jìn)行試驗，可将标本放於(yú)-20℃保存，但應避免反複(fù)凍(dòng)融

2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

人氧化型谷胱甘肽（GSSG）試劑盒操作步驟

1.  标準品的稀釋：本試劑(jì)盒提供原倍标準品一支，用戶(hù)可按照下列圖表在小試管中進行稀

釋。

160µg/L  5 号标準品  150µl的原倍标準品加入150µl标準品稀釋液

80µg/L  4 号标準品  150µl的5 号标準品加入150µl标準品稀釋液

40µg/L  3 号标準品  150µl的4 号标準品加入150µl标準品稀釋液

20µg/L  2 号标準品  150µl的3 号标準品加入150µl标準品稀釋液

10µg/L  1 号标準品  150µl的2 号标準品加入150µl标準品稀釋液  

2.  加樣
：分别設空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶标試劑(jì)，其餘各步操作相同） 、标準孔、待測(cè)樣(yàng)品孔。 在酶标包被闆上标準品準確(què)加樣(yàng)50µl， 待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋(shì)液40µl，

然後再加待測樣品10µl（樣品zui終稀釋度爲5倍）。加樣将樣品加於(yú)酶标闆孔底部，盡(jǐn)

量不觸(chù)及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

3.  溫育：用封闆膜封闆後置37℃溫育30分鍾。      

4.  配液：将30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋後備用

5.  洗滌(dí)：小心揭掉封闆膜
，棄去液體，甩幹(gàn)，每孔加滿洗滌(dí)液，靜置 30 秒後棄去，如此

重複 5次，拍幹。

6.  加酶：每孔加入酶标試劑50µl，空白孔除外。   

7.  溫育：操作同3。

8.  洗滌：操作同5。

9.  顯色：每孔先加入顯色劑A50µl，再加入顯色劑B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色

15 分鍾.

10.  終止：每孔加終止液 50µl，終止反應（此時藍(lán)色立轉黃(huáng)色） 。

11.  測定：以空白空調零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD 值） 。 測定應在加終止

液後 15分鍾以内進行。  

人氧化型谷胱甘肽（GSSG）試劑盒注意事項

1．試劑盒從(cóng)冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡 15-30 分鍾後(hòu)方可使用，酶标包被闆開(kāi)封後(hòu)如未

用完，闆條(tiáo)應(yīng)裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌(dí)液可能會(huì)有結晶析出
，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌(dí)時不影響結果。

3．各步加樣均應使用加樣器，並(bìng)經常校對其準確(què)性，以避免試驗誤差。一次加樣時間

控制在5 分鍾内，如标本數量多，推薦(jiàn)使用排槍(qiāng)加樣。

4． 請每次測(cè)定的同時做标準曲線，做複(fù)孔。如标本中待測(cè)物質含量過高（樣本OD 值

大於标準品孔*孔的OD 值） ，請(qǐng)先用樣品稀釋(shì)液稀釋(shì)一定倍數（n倍）後再測定，計

算時請(qǐng)zui後(hòu)乘以總稀釋倍數（×n×5） 。

5． 封闆(bǎn)膜隻(zhǐ)限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物請避光保存。

7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶标儀讀(dú)數爲準.

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳(chuán)染物處(chù)理。

9．本試(shì)劑(jì)不同批号組分不得混用。

10.  如與英文說(shuō)明書(shū)有異，以英文說(shuō)明書(shū)爲準。

保存條件及有效期

1．試劑盒保存： ；2-8℃。

2．有效期：6個月