大鼠尿激酶

ELISA試(shì)劑(jì)盒，ELISPOT試(shì)劑(jì)盒

大鼠尿激酶試劑盒 Rat urokinase,UK ELISA KIT

可測種屬：人、大小鼠、豚鼠、兔子、豬、犬、猴、馬…
可測标本：血清、血漿、細胞上清液、尿液、體液、灌洗液
規格：96T/48T 中英文雙版說明書 提供代測 科研試劑
經營品牌：RD、RB、IBL
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：2-8℃。
2．有效期：6個月
運輸條件：低溫運輸，用幹冰或者冰袋低溫運輸。

大鼠尿激酶 ELISA技術操作要點，酶和底物
ELISA中所用的酶要求純度高、催化反應的轉化率高、專一性強、性質穩定、來源豐富、價格不貴、制備成的酶标抗體或抗原性質穩定，繼續保留著它的活性部分和催化能力。在受檢标本中不存在與标記酶相同的酶。另外它的相應底物應易於制備和保存，價格低廉，有色産物易於測定，光吸收高。ELISA中zui常用的酶爲辣根過氧化酶（HRP）和從牛腸粘膜或大腸杆菌提取的堿性磷酸酶（AP）。
HRP在蔬菜作物辣根中含量很高，純化方法也不複雜。它是一種糖蛋白，含糖量約18％；分子量爲44kD；是一種複合酶，由主酶（酶蛋白）和輔基（亞鐵血紅素）結合而成的一種卟啉蛋白質。主酶爲無色糖蛋白，在275nm波長處有zui高吸收峰；輔基是深棕色的含鐵卟啉環，在403nm波長處有zui高吸收峰。
ELISA技術操作要點，結合物
酶标記的抗原或抗體稱爲結合物（conjugate）。抗原由於化學結構不同，可用不同的方法與酶結合
。如爲蛋白質抗原，基本上可參考抗體酶标記的方法。制備抗體酶結合物的方法通常有以下幾種。
1．戊二醛交聯法戊二醛是一種雙功能團試劑，可以使酶與蛋白質或其他抗原的氨基通過它而偶聯。戊二醛交聯可用一步法（如連接AP），也可用二步法（如連接HRP）。舉例如下：
2～5mg純抗體與5mgAP混合於0.1mol/LpH6.8的磷酸緩沖液1ml中，4℃下對同上緩沖液透析平衡。磁力攪拌下，緩慢加入1％戊二醛0.05ml，在室溫下放置2小時。在4℃下對0.05mol/LpH8.0Tris緩沖液透析平衡，即得酶标抗體。
辣根過氧化物酶可溶解於50％飽和度硫酸铵中。用上法交聯後可用50％飽和度硫酸铵沉澱酶标抗體，棄去上清中遊離酶。
戊二醛一步法操作簡便、有效，而且重複性好。缺點是交聯時分子間的比例不嚴格，大小也不一，影響效果。
制備HRP抗體結合物也可用二步法，即先将HRP與戊二醛作用，透析除去戊二醛，在pH9.5緩沖液中再與抗體作用而形成酶标抗體。此法的效率可高於一步法10倍左右。
2．過碘酸鹽氧化法本法隻用於HRP的交聯。該酶含18％碳水化合物，過碘酸鹽将其分子表面的多糖氧化爲醛基。用硼氫化鈉（NaBH4）中和多餘的過碘酸。酶上的醛根很活潑，可與蛋白質結合，形成按摩爾比例結合的酶标結合物。有人認爲此法爲辣根過氧化物酶交聯zui有效的方法。但也有隻認爲由於所用試劑較爲劇烈，各批實驗結果不易重複。

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