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産品名稱:大鼠細胞色素P4502E1
英文名稱(chēng):Rat cytochrome P450 2E1,CYP2E1 ELISA KIT
産品規格:96人份/48人份
各種種屬:人、大小鼠、豚鼠、兔子、豬、犬、牛、羊…
标本齊全:血清、血漿、細胞培養上清液、組織勻漿、組織液、關節液、胸腔溢液等…
經營品牌:美國RD分裝,原裝、美國RB原裝
保存條件:2-8℃
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上海勁馬生物公司銷售各種ELISA試劑盒,有RD,RB原裝,标本齊全,提供代測。如有疑問,可與上海勁馬銷售或技術 負責人:王
大鼠細胞色素P4502E1 ELISA技術操作要點,結合物
酶标記的抗原或抗體稱爲結合物(conjugate)。抗原由於化學結構不同,可用不同的方法與酶結合。如爲蛋白質抗原,基本上可參考抗體酶标記的方法。制備抗體酶結合物的方法通常有以下幾種。
1.戊二醛交聯法戊二醛是一種雙功能團試劑,可以使酶與蛋白質或其他抗原的氨基通過它而偶聯。戊二醛交聯可用一步法(如連接AP),也可用二步法(如連接HRP)。舉例如下:
2~5mg純抗體與5mgAP混合於0.1mol/LpH6.8的磷酸緩沖液1ml中,4℃下對同上緩沖液透析平衡。磁力攪拌下,緩慢加入1%戊二醛0.05ml,在室溫下放置2小時。在4℃下對0.05mol/LpH8.0Tris緩沖液透析平衡,即得酶标抗體。
辣根過氧化物酶可溶解於50%飽和度硫酸铵中。用上法交聯後可用50%飽和度硫酸铵沉澱酶标抗體,棄去上清中遊離酶。
戊二醛一步法操作簡便、有效,而且重複性好。缺點是交聯時分子間的比例不嚴格,大小也不一,影響效果。
制備HRP抗體結合物也可用二步法,即先将HRP與戊二醛作用,透析除去戊二醛,在pH9.5緩沖液中再與抗體作用而形成酶标抗體。此法的效率可高於一步法10倍左右。
2.過碘酸鹽氧化法本法隻用於HRP的交聯。該酶含18%碳水化合物,過碘酸鹽将其分子表面的多糖氧化爲醛基。用硼氫化鈉(NaBH4)中和多餘的過碘酸。酶上的醛根很活潑,可與蛋白質結合,形成按摩爾比例結合的酶标結合物。有人認爲此法爲辣根過氧化物酶交聯zui有效的方法。但也有隻認爲由於所用試劑較爲劇烈,各批實驗結果不易重複。
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